蛋白磷酸化和去磷酸化在调节细胞内信号事件中发挥着重要作用，此过程主要由蛋白酪氨酸激酶（PTK）和酪氨酸去磷酸酶（PTP）所调控[1]。在血小板受刺激时，PTK发生磷酸化进而启动血小板活化信号，而PTP使磷酸化蛋白去磷酸化以下调血小板功能，阻止其进一步活化[2,3]。PTPN22（proteintyrosinephospha-tase，nonreceptortype22）在造血细胞中表达，是一种负调控T细胞信号的蛋白酪氨酸磷酸酶，通过去磷酸化T细胞信号通路的关键激酶来抑制T细胞抗原受体（TCR）信号。

年9月，徐州医科大学血液病研究所乔建林团队在血液学领域顶级期刊Blood发表题为“ProteintyrosinephosphatasePTPN22negativelymodulatesplateletfunctionandthrombusformation”的研究论文，研究了PTPN22在血小板中的表达及其作用，揭示了血小板功能和动脉血栓调控的新机制。研究生王霞敏、魏光玉和丁洋洋是论文的共同第一作者，乔建林教授、徐开林教授和曾令宇教授为共同通讯作者。

研究材料

PTPN22-/-小鼠（由赛业生物提供）、野生型小鼠

技术方法

流式细胞术、动脉血栓模型，深静脉血栓模型、出血模型、蛋白印迹、免疫共沉淀、定量磷酸化蛋白组学、蛋白体外表达及纯化、体外去磷酸化检测等。

技术路线

01PTPN22-/-和WT小鼠

02体内出血和血栓形成模型

03体外血小板功能检测分析

04磷酸化蛋白组学探索PTPN22潜在底物

05体外分析验证组学的结果

研究结果

1.血小板表达PTPN22，且其缺失促进血小板参与体内止血和血栓形成

研究者首先在人和小鼠血小板及巨核细胞均检测到了PTPN22（图1）。利用PTPN22基因敲除小鼠（该小鼠由赛业生物提供），发现PTPN22敲除显著增强血小板参与体内止血和动脉血栓形成。体外flowchamber实验也验证PTPN22敲除血小板的粘附和体外血栓形成显著增强。

2.PTPN22敲除显著增强血小板聚集、颗粒释放、aIIbb3活化和钙动员

为探索PTPN22对体外血小板功能的影响，研究者分离血小板，使用不用激活剂来刺激血小板，结果发现PTPN22缺失显著促进体外血小板聚集，颗粒释放、aIIbb3活化及钙离子动员（图2）。

3.PTPN22缺失显著促进血小板铺展和血块收缩

为分析PTPN22对整合素aIIbb3“由外向内”信号转导的影响，研究者进行了血小板铺展和血块收缩实验。结果发现：PTPN22敲除的血小板在胶原或纤维蛋白原上的铺展能力显著增强，同时凝血酶诱导的血块收缩也显著加快（图3）。

4.PTPN22敲除影响血小板活化后众多蛋白的磷酸化

为探索PTPN22参与调控血小板功能的分子机制，研究者进行了定量磷酸化蛋白组学分析，发现PTPN22敲除引起血小板内众多蛋白磷酸化水平的差异（图4）。通过比较WT和PTPN22敲除血小板活化后的磷酸化肽段，发现9个上调的磷酸化肽段和18个下调的。由于PTPN22敲除引起血小板活性增加，为此研究者重点